全自動蛋白純化儀器——全自動蛋白分離純化方法之凝膠過濾層析法

由于蛋白質具有顆粒大且不同蛋白質分子大小不同等特性，因而全自動蛋白純化儀器可以依據(jù)蛋白質分子大小不同而停止別離，這種別離辦法有透析、超濾、離心和凝膠過濾。在此其中凝膠過濾是依據(jù)分子大小別離蛋白質混合物極為有效的辦法之一，也稱為分子排阻層析或分子篩層析。

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全自動蛋白純化儀器的凝膠過濾可以應用被分離物質分子大小不同及固定相（凝膠）具有分子篩的特性，將被別離物質各成分依照分子大小分開，從而到達別離的目的。在一些全自動蛋白純化儀器中，凝膠過濾層析法常與其他層析辦法配合著運用。

凝膠層析是全自動蛋白純化儀器利用分子篩作用對蛋白質進行分離。凝膠是具有三維空間多孔網(wǎng)狀結構的物質，經(jīng)過適當?shù)娜芤浩胶夂?，裝入層析柱。一種含有各種分子的樣品溶液緩慢地流經(jīng)凝膠層析柱時，大分子物質不易進入凝膠顆粒的微孔，只能分布于顆粒之間，因此在全自動蛋白純化儀器洗脫時向下移動的速度較快，會先被洗脫。小分子物質除了可在凝膠顆粒間隙中擴散外，還可以進入凝膠顆粒的微孔中，洗脫時向下移動的速度較慢，隨后被洗脫。因此，蛋白質分子按分子大小被分離。

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凝膠過濾層析法用于全自動蛋白純化儀器的分離純化，具有操作條件溫和，適用于別離不穩(wěn)定的化合物的特性。且凝膠顆粒不帶電荷，不與被別離物質發(fā)作反響，因而溶質回收率接近100%，而且全自動蛋白純化儀器簡單、別離效果好、重現(xiàn)性強，凝膠柱還可以重復運用，所以該辦法被普遍應用于蛋白質等大分子物質非別離純化、分子質量測定、脫鹽等實驗中。

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